鱟試驗
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檢測內(nèi)毒素血癥的一種試驗。鱟系海邊棲生的一種大型節(jié)肢動物,屬蜘蛛綱。其多功能血細胞(變形細胞)的溶解物中含有一種可凝性蛋白質(zhì),在極微量內(nèi)毒素(0.0005vg/ml)存在時可形成凝膠。本試驗即利用此原理測定血液或其他樣品中的微量內(nèi)毒素。在臨床病例,下列疾病陽性率較高:內(nèi)毒素性休克、急性化膿性膽管炎、重癥肝炎、腹膜炎、肝硬化等。內(nèi)毒素檢出陽性病例中約有2/3導致死亡。
鱟試劑是從棲生于海洋的節(jié)肢動物“鱟”的蘭色血液中提取變形細胞溶解物,經(jīng)低溫冷凍干燥而成的生物試劑,專用于細菌內(nèi)毒素檢測。鱟試劑因能與細菌內(nèi)毒素及β-葡聚糖反應(yīng)形成凝膠而被廣泛用于檢測食品、水源、藥品、醫(yī)療器械、動物體液等不同樣品中的內(nèi)毒素。使用鱟試劑檢測的試驗稱為鱟試驗。根據(jù)鱟試劑反應(yīng)的原理可分為定性鱟試劑和定量鱟試劑,對應(yīng)的試驗稱定性鱟試驗和定量鱟試驗。定性鱟試驗主要用于藥品,醫(yī)療器械等產(chǎn)品的內(nèi)毒素定性檢驗。定量鱟試驗主要用于檢測臨床病人、動物體內(nèi)內(nèi)毒素等方面,以便為醫(yī)生用藥提供參考。
鱟試驗按方法分:
凝膠法
動態(tài)濁度法
終點濁度法
動態(tài)顯色法
終點顯色法
凝膠法系通過鱟試劑與內(nèi)毒素產(chǎn)生凝集反應(yīng)的原理來定性檢測或半定量內(nèi)毒素的方法。凝膠法鱟試劑常見規(guī)格為0.1ml/支或0.5ml/支或者更大裝量,使用時應(yīng)加除熱原水(細菌內(nèi)毒素檢查用水)復(fù)溶后使用。凝膠法是通過觀察有無凝膠形成作為反應(yīng)的終點。此法操作比較簡單,經(jīng)濟,不需要專用測定設(shè)備,可以進行定性或半定量測定。
動態(tài)濁度法、終點濁度法、動態(tài)顯色法、終點顯色法,這四種方法都是定量檢測內(nèi)毒素的。
根據(jù)檢測原理,終點濁度法和動態(tài)濁度法都屬于濁度法。濁度法系利用檢測鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中的濁度變化而測定內(nèi)毒素含量的方法。終點濁度法未見商品化產(chǎn)品。動態(tài)濁度法(又稱動態(tài)比濁法)是檢測反應(yīng)混合物的濁度上升某一預(yù)先設(shè)定的吸光度所需要的反應(yīng)時間,或是檢測濁度增加速度的方法。
終點顯色法和動態(tài)顯色法都是屬于顯色基質(zhì)法。顯色基質(zhì)法系利用鱟試劑與內(nèi)毒素反應(yīng)過程中產(chǎn)生的凝固酶使特定底物顯色釋放出的呈色團的多少而測定內(nèi)毒素含量的方法,根據(jù)產(chǎn)物顏色判斷內(nèi)毒素濃度,又稱為比色法。廈門鱟試劑廠于2005年推出以鱟四肽為顯色底物的鱟試劑盒,抗干擾能力強, 靈敏度高達0.005EU/ml, 質(zhì)量達到國際領(lǐng)先水平。目前已有500多家單位使用該試劑盒,并有部分單位發(fā)表相應(yīng)文獻。國內(nèi)有少量國外產(chǎn)品,但價格遠高于國產(chǎn)試劑,到貨周期長。
如果您僅需要檢測樣品的內(nèi)毒素限量,可以選擇凝膠法鱟試劑,通過確定內(nèi)毒素限值及最大有效稀釋倍數(shù),做樣品的干擾試驗從而確定使用的鱟試劑的靈敏度。
如果您需要定量測定樣品中內(nèi)毒素含量則應(yīng)選擇顯色基質(zhì)鱟試劑盒或動態(tài)濁度法鱟試劑。
動態(tài)濁度法與動態(tài)顯色法需要帶溫育系統(tǒng)的動態(tài)光度測定儀器及配套軟件,例如,微板鱟試儀ELx808及軟件TALgent 或Gen5。動態(tài)濁度法與動態(tài)顯色法簡單方便、一步即成,線性范圍寬。
終點顯色法需要配套酶標儀或可見分光光度計進行檢測。配套帶有溫育系統(tǒng)的酶標儀,如微板鱟試儀ELx808,可減少試劑用量。
目錄 |
標本采集
用經(jīng)處理過的,無熱源,無污染試管取血2ml送檢。
正常值范
陰性反應(yīng)。
臨床意義
陽性者,見于標本中含有內(nèi)毒素,可認為被細菌污染過。
怎樣看化驗單專題
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