重組人生長激素
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重組人生長激素
拼音名：Chongzu Ren Shengzhangjisu
英文名：Recombinant Human Somatropin
書頁號：2000年版二部-494
本品是由191個氨基酸殘基或N端有一甲硫氨酸的192個氨基酸殘基組成的蛋白，可加適量賦形劑或
穩(wěn)定劑。含重組人生長激素量應(yīng)為標(biāo)示量的90.0％～110.0％。
本品由DNA重組技術(shù)生產(chǎn)，必須在生產(chǎn)過程中，用體內(nèi)生物測定方法測定其生物效價，每1mg蛋白效
價不得少于2.5單位。
重組人生長激素中殘余宿主DNA和宿主細(xì)胞蛋白為與生產(chǎn)過程相關(guān)的、潛在的特異性雜質(zhì)，必須在生
產(chǎn)過程中嚴(yán)格控制，其限度應(yīng)符合有關(guān)規(guī)定?！ ?/p>
目錄 |
性狀
本品為白色凍干粉末?！ ?/p>
鑒別
(1)取本品，加水制成每1ml中含2mg的溶液后，加入等體積的樣品緩沖液(取濃縮膠緩沖液
2.5ml、20％十二烷基硫酸鈉2.5ml、0.1％溴酚藍(lán)溶液1.0ml、87％甘油3.5ml，加水至10ml)，再加β-巰基乙
醇至終濃度為5％，置水浴中3分鐘，放冷，作為供試品溶液；另取重組人生長激素對照品或甲酰化重組人生
長激素對照品，同法制備，作為對照品溶液。取對照品溶液和供試品溶液各5μl，加至樣品孔，照電泳法(附錄
Ⅴ F 第五法，銀染色)試驗，供試品主成分遷移率應(yīng)與相應(yīng)的對照品遷移率一致。
(2)在相關(guān)蛋白質(zhì)檢查項下記錄的色譜圖中，供試品主峰的保留時間應(yīng)與相應(yīng)的對照品(重組人生長激
素或甲?；亟M人生長激素對照品)的保留時間一致。
(3)取本品適量，用水制成每1ml中含2mg的溶液，取150μl，加三羥甲基氨基甲烷-醋酸緩沖液(取氯
化鈣0.294g、三羥甲基氨基甲烷12.11g，加水400ml使溶解，再用5mol/L醋酸溶液調(diào)節(jié)pH值至8.5，加
水至500ml)150μl、胰蛋白酶溶液[取經(jīng)TPCK處理的胰蛋白酶適量，用1mol/L醋酸-醋酸鈉緩沖液
(pH5.0)制成每1ml中含1mg的溶液]10μl，混勻，置37℃水浴中4小時，加冰醋酸60μl終止反應(yīng)，作為供試
品溶液；另取重組人生長激素或甲?；亟M人生長激素對照品適量，同法制備，作為對照品溶液。照高效液相
色譜法(附錄Ⅴ D)試驗，以辛基硅烷鍵合硅膠為填充劑(5～10μm)；以0.1％三氟醋酸溶液為流動相A，
0.1％三氟醋酸的乙腈溶液為流動相B，進行梯度洗脫。流速為每分鐘1.0ml；柱溫為35℃；檢測波長
為214nm。
時間 流動相A 流動相B
0分 100％ 0％
20分 80％ 20％
45分 75％ 25％
70分 50％ 50％
75分 20％ 80％
取對照品溶液和供試品溶液各100μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品的肽圖譜應(yīng)與對照品
的肽圖譜一致。
檢查
相關(guān)蛋白質(zhì) 取本品適量，用0.05mol/L三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液(pH7.5)制成每1ml
中含1mg的溶液，作為供試品溶液；另取重組人生長激素或甲?；亟M人生長激素對照品適量，同法制備，
作為對照品溶液。照高效液相色譜法(附錄Ⅴ D)測定，以丁基硅烷鍵合硅膠為填充劑(5～10μm)；0.05mol/L
三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩沖液(pH7.5)-正丙醇(約為71:29)為流動相，調(diào)節(jié)流動相中正丙醇比例使人生
長激素主峰保留時間為30～36分鐘；流速為每分鐘0.5ml；柱溫為45℃；檢測波長為220nm。取系統(tǒng)適用性
試驗用溶液[取重組人生長激素對照品或甲?；亟M人生長激素對照品，用上述三羥甲基氨基甲烷-鹽酸緩
沖液制成每1ml中含2mg的溶液，加過氧化氫溶液使終濃度為0.01％(ml/ml)，在4℃放置5小時后，每
1ml加4.5mg的L-甲硫氨酸]20μl注入液相色譜儀，重組人生長激素主峰與氧化的重組人生長激素峰之間
的分離度應(yīng)符合規(guī)定。取供試品溶液20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按面積歸一化法計算，總相關(guān)蛋白
質(zhì)含量不得過10.0％。
高分子蛋白質(zhì) 取本品適量，照含量測定項下方法檢查，按面積歸一化法計算，高分子蛋白質(zhì)含量不得
過4.0％。
無菌 取本品，依法檢查(附錄Ⅺ H 薄膜過濾法)，應(yīng)符合規(guī)定。
水分 取本品，照水分測定法(附錄Ⅷ M 第一法 A)測定，含水分不得過10.0％。
細(xì)菌內(nèi)毒素 取本品，依法檢查(附錄Ⅺ E)，每1mg重組人生長激素中含內(nèi)毒素的量應(yīng)小于5EU?！ ?/p>
含量測定
照高效液相色譜法(附錄Ⅴ D)測定。
色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗 以適合分離分子量為5000～60000球狀蛋白的色譜用親水硅膠為填充
劑；以0.395％碳酸氫銨溶液為流動相；流速為每分鐘0.6ml；檢測波長為214nm。取系統(tǒng)適用性試驗用溶液
(取人生長激素單體-二聚體對照品，用流動相制成每1ml中含1.5mg的溶液)20μl注入液相色譜儀，以人生
長激素單體和二聚體之間的峰谷高與二聚體的峰高之比作為分離度，分離度應(yīng)不大于0.6。
測定法 取本品，加流動相制成每1ml中含1.0mg的溶液，取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取
重組人生長激素對照品適量，同法則定。按外標(biāo)法以峰面積計算?！ ?/p>
類別
生長激素類藥?！ ?/p>
貯藏
密閉，2～8℃保存?！ ?/p>
制劑
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